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[图文]桑蚕微粒子病病原鉴定技术规程         ★★★ 【字体:
桑蚕微粒子病病原鉴定技术规程
作者:佚名   来源:广西壮族自治区质量技术监督局   点击数:2540   更新时间:2017/3/14

蚕微粒子病病原鉴定技术规程

DB 45 /T 972 -2014

1 范围

本标准规定了桑蚕微粒子病病原的鉴定技术方法。

本标准适用于桑蚕(幼虫、蛹、蛾、卵、卵壳、排泄物及其脱离物)、昆虫、桑叶、水源、土壤以及环境尘埃等物质中微粒子孢子的检验和鉴定。蓖麻蚕微粒子病病原的鉴定可参照本标准执行。

2 术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1  

桑蚕微粒子病 pebrine disease of silkworm

是由原生动物微粒子虫寄生在桑蚕体内而引起的一种疾病。

2.2  

 样本 sample

指按照一定的抽样规则从总体中取出的一部分个体称样本。

2.3  

批次 batch                                              

指在同一时期、同一地点饲养的桑蚕群体,称为一个批次。也称造。

3 试剂

 浓盐酸(HCl)、 氢氧化钾(KOH)(分析纯)、蒸馏水。

4 仪器、设备

生物显微镜、生化培养箱(温控范围15 ℃~45 ℃;湿控范围60 %90 %RH)、冰箱、天平(感量:0.001 g)、离心机、载玻片、盖玻片、量筒、研钵、镊子、烧杯、移液管、滤网、采样袋。

5 检验方法

5.1 样本要求

5.1.1 每个样本独立包装,避免相互污染。

5.1.2 桑蚕的幼虫、蛹、蛾、粪便及昆虫等容易腐烂变质的样本需烘干处理后送检,烘烤温度范围60 70 ℃,不宜用71 ℃以上高温烘烤。

5.1.3 送检样本上注明样本名称、来源、数量、采样地点、采样人及采样日期等信息,并附送检清单。

5.2 样本收存

5.2.1 样本接收后,应立即登记,编写检验号,将样本平均分成2等份,1份作为检样,另1份作为备检样。

5.2.2 妥善保管样本,并及时按检验规程进行检验。样本保管室应保持通风干燥,防潮、防虫、防鼠、防损坏、防霉变,确保样本完好。

5.3 样本检验

5.3.1 样液制备

桑蚕(幼虫、蛹、蛾、卵、卵壳、排泄物、脱离物)、桑园害虫等检样放入研钵孔中,加入1 %2 %氢氧化钾溶液1 ml5 ml,充分研磨后收集研磨液;桑叶、桑园土壤、环境尘埃等检样经水清洗后收集清洗液,将收集到的研磨液或清洗液用滤网过滤,过滤液经低速离心机3 000 r/min离心3 min后,弃去上清液,再加1 %2 %氢氧化钾溶液0.5 ml1 ml于离心管中振荡1 min,待检。

5.3.2 显微镜检验

于每支离心管的检样中取2滴样液,点于2块载玻片上,盖上盖玻片制成镜检标本,用600倍光学显微镜2人对检,每滴样液观察至少10个视野。若2人检验结果不一致或有微粒子孢子,须复查确认。

6 结果判定

显微镜下发现呈椭圆形、卵圆形、梨形,大小为(2.9 μm4.1 μm)×(1.7 μm2.1 μm),具有强折光性,呈淡绿(蓝)色,在标本液中下层,镜检观察可以看到其上下摆动或随水滚动等特征的孢子,则判定其为微粒子孢子(桑蚕微粒子孢子图见附录A)。

7 疑似孢子鉴定

7.1 碘酒鉴别法

将碘溶解于50 %60 %酒精中,配成1 %2 %浓度的碘溶液。于样液中加入此碘液后,用600倍光学显微镜镜检。经染色,微粒子孢子呈淡黄色,花粉粒、淀粉粒等则呈青蓝色或紫色。

7.2 盐酸鉴别法

取样液2滴,分别滴于载玻片上,待自然干燥后在其中一点加一滴浓盐酸(比重1.15),另一点加蒸馏水作对照,在27 ℃生化培养箱中放置10 min20 min后,盖上盖玻片,用600倍光学显微镜镜检。经盐酸作用后,若为微粒子孢子即溶解消失,若为真菌孢子、细菌和酵母菌孢子等类似物,仍保持原状。

A  

A           

附 录 A
(资料性附录)
桑蚕微粒子孢子图

桑蚕微粒子孢子图见图A.1

 

蚕业科技录入:何骥    责任编辑:何骥 
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